· PolyacrylamidGel skal ved acrylamidmonomer, polymerisationsstartmateriale, katalysator og ret til salt og pufferblanding sammen.
· Acrylamidog bis (n, n '- methylen dobbelt acrylamid) er monomerformen gelmatrix.
· Ammoniumpersulfat Start klæbende polymerisationsproces. Formuleringen af limen kræver 10% ammoniumpersulfatopløsning fremstillet i vand. De fleste af oplysningerne indikerede et behov for aktiv brug. Imidlertid kan 10% -opløsningen placeres på 4 ℃ i flere uger uden signifikant tab af aktivitet. Make op til 10 ml og kasser, når limet ikke samles.
Tip: Procentdelen afAcrylamidI sekventering er lim og proteinlim ikke det samme. Hvis du bruger premade acrylamid: BIS -opløsning, skal du sørge for at få den rigtige flaske.
· Temed (n, n, n ', n'- tetramethylethylendiamin) er en katalysator i en brun flaske, placeret i køleskabet. Tilsæt lige inden du hælder lim.
· Polyacrylamidelektroforese anvendt glas i elektroforese skal vaskes før og efter hver gang. Efter elektroforese skal du vaske med en blød børste og klud i varmt sæbevand, skyl med destilleret vand og stå til tør.
· Fugt og støv kan forårsage med hul polymer. Før elektroforese skal du rense glaspladen med glasrenser og tør den med en blød børste. Vask med destilleret vand og tør grundigt med et papiraftørring. Skylning med 70% ethanol før tørring med papir hjælper med at rengøre og fremskynde tørring. Tilsæt prøver af acrylamid successivt: bis, vand, pufferopløsning, ammoniumpersulfat, temed. Ryst godt og hæld straks.
Det er ikke nødvendigt at afgassere polyacrylamid før polymerisation. (Acrylamid plejede at placeres i et vakuum for at fjerne bobler, fordi ilt hæmmer polymerisation.)
Horisontale limpunktsprøvetips.
· Læg et stykke sort papir i bundboksen, sort baggrund for at lave et prøveprøvehul for at se mere tydeligt.
· Limtankfyldt buffer, lige over kolloidet.
· Hvis kanten har et lys, skal du tænde for lysene, lad lys skinne kolloid. Tegn prøven ind i pipetten.
· Brug af automatisk pipetteringsenhed.
· I 10-200 Mu 1 flydende bevægelsespunkt kan bruges i de fleste af punkterne på prøven. For meget små prøvehuller (mindre end 10μ1) er det lange pipettehoved, der bruges til sekventeringslim, mere praktisk.
· Pipettering lige nedsænket i prøven, der indånder langsomt bevægende væske. Prøven kan forekomme klistret med glycerin, og hurtig pumpe kan trække luftbobler ind i pipettehovedet.
· Prøver efter indånding af pipetthoved, bevæger væske hovedet forsigtigt på kanten af røret eller tørre papir suger væskehoved uden for dråberne. Vær forsigtig med ikke at suge prøven.
Placer prøven i prøvehullet
· Pipetteringsenhed For at holde et lille tryk skal du gøre prøverne lidt til at bevæge overløb flydende hoved.
· Pipettinghovedet, der er indsat i bufferen, lidt højere end plethullerne, opretholder positivt tryk. Spidsen af pipetten kan indsættes i et lille hul.
· Langsomt og støt prøverne ud. Pipettspidsen er placeret over punktprøveprøven, og prøven synker ned i hullet. Lad prøven synke for at fylde prøvehullet i stedet for at skubbe ind.
· Når den sidste dråbe prøve med flydende hoved, væske flytter til den anden etappe, løfter langsomt væskebevægelsen, bevæger sig ud af buffer
Hvordan laver man lodret limprøvetagning?
· Lodrette limpunktprøvehuller dannet mellem to glasstykker. I meget tynd lim kan pipettehovedet ikke engang indsættes mellem to glasplader. Se glycerinet! Sæt pipettehovedet over prøvehullet, og prøven synker ned i hullet.
· Punktprøve før skal du sørge for at sætte det lodrette punkt af polypropylen acylgelprøvehul skylles rent. Vask det upolymeriserede acrylamid væk og vandet, der kan vises i bunden af prøvehullet. Vandet kan gøre prøvehullet markant mindre. Brug en 25 ml eller 50 ml sprøjte og en 18-gauge nål. Hæld elektroforese -pufferen i, og skyl prøven omhyggeligt.
· Det kan være vanskeligt at se prøvehullet, men på det samme er resten let. Hvis der er overskydende huller, kan prøvebufferen testes med bromophenolblå.
Posttid: Mar-31-2023